2003

CONIC 2003

MARCUSSI, S.*; TICLI, F.K.**; SILVEIRA, L.B.*; GONÇALVES, M.A.*; NETO, M.M.*; PEREIRA, P.*; FRANÇA, S.C.*; SOARES, A.M.*

Introdução

As Fosfolipases A2 (PLA2s) de venenos de serpentes induzem diferentes efeitos tóxicos e farmacológicos como miotoxicidade, neurotoxicidade, edema, letalidade, hipotensão, inibição da agregação plaquetária, convulsão, anticoagulação e outros. Inibidores naturais de PLA2s (PLIs) foram encontrados em diferentes organismos como plantas, esponjas marinhas, plasma de serpentes e de gambá.

MARCUSSI, S.; URZEDA, M. A.; MAZZI, M. V.; AMUI, S. F.; FERNANDES, V. C.; CAMBRAIA, R. S.; SILVEIRA, L.B.; FRANÇA, S.C.; SOARES, A. M.

Introdução

As fosfolipases A2 (PLA2s) são enzimas que catalisam a hidrólise dos fosfolipídeos. Encontram-se amplamente distribuídas em tecidos de mamíferos, microorganismos e venenos de répteis e artrópodes.

Amui, SF(1); Marcussi, S(2); Urzêda, MA(3); Silveira, LB(3); Coelho, MFB(4); Pereira, AMS(3); França, SC(3); Soares, AM(1)

Jatropha elliptica (Pohl.) Muell. Arg., uma planta herbácea-subarbustiva da família Euphorbiaceae, conhecida popularmente como “batata de tiu, jalapão, raiz de cobra, e tiu”, é uma espécie característica dos cerrados brasileiros muito utilizada na medicina popular como depurativo do sangue, no tratamento de sífilis e em envenenamentos ofídicos, entre outras utilizações (Pio Corrêa, 1984; Van Den Berg & Silva, 1988). Jatropha elliptica foi selecionada para este estudo por apresentar atividade antiofídica de uso preconizado na medicina popular na região do Brasil Central (Silva, 1998). O uso de extratos de plantas como antídoto para venenos de serpentes é uma antiga opção utilizada em muitas comunidades que não têm acesso à soroterapia, podendo ser um substituto alternativo e/ou complementar. Acidentes com animais peçonhentos constituem um problema de saúde pública, tanto pela freqüência com que ocorrem, quanto pela gravidade de muitos deles (Ribeiro, 1990). No Brasil ocorrem entre 19 a 22 mil casos de acidentes ofídicos por ano, dos quais 90,5% são causados por serpentes do gênero Bothrops (Pinho e Pereira, 2001). Diversas espécies vegetais tem sido descritas como antiofídicas e alguns princípios ativos foram isolados e caracterizados, como por exemplo, de Eclipta prostata, Tabernaemontana catharinensis, Casearia sylvestris, Mandevilla velutina, Sapindus sapindus e Cordia verbenacea.

MONTEIRO, L.F.; SILVA, L.A.; COPPEDE, J.; GONÇALVES, C.A.G.; SANTOS, F.; SANTANA, E.I.F.; NASCIMENTO, M.M.; MATRANGULO, P.V.F.; BOM, C.A.M.; ARROYO, A.G.; OLIVEIRA, A.H.; FEITOZA, J.A.; PIRES, M.A.; PIZZO, V.; MARCUSSI, S.; SOARES, A.M.

Os venenos animais são ricos numa variedade de peptídeos, proteínas e enzimas com diferentes efeitos tóxicos e farmacológicos de interesse na clínica médica-científica. Proteínas enzimáticas como serino-proteases, metaloproteases e fosfolipases A2 são responsáveis pela indução das atividades coagulante, hemorrágica e miotóxica, respectivamente, induzida pelos venenos de serpentes do gênero Bothrops. Enquanto que no veneno de cascavel Crotalus d. terrificus apresenta proteínas altamente neurotóxicas. Este trabalho propõe novas estratégias cromatográficas para o isolamento de fosfolipases A2 miotóxicas e neurotóxicas, além de enzimas coagulantes como as serino-proteases. Para o isolamento das serino-proteases foi utilizado cromatografia de afinidade em Benzamidina-Sepharose, enquanto que para o isolamento das PLA2s foram utilizadas cromatografia de afinidade Anti-PLA2s-Sepharose e resina de hidrofobicidade em Fenil-Sepharose. O grau de pureza foi avaliado em eletroforese desnaturante (SDS-PAGE) coradas por azul coomassie e pela coloração de prata. Os métodos utilizando cromatografia de afinidade mostraram-se eficientes para o isolamento das proteínas em alto grau de pureza (80-90%) a partir do veneno total, enquanto que a resina de hidrofobicidade foi utilizada como segunda etapa na purificação completa destas proteínas. A SDS-PAGE confirmou o grau de pureza destas amostras, sendo que as PLA2s apresentaram uma massa molecular de ~13.500 e as serino-protease ~30.000, respectivamente. Estas novas metodologias se mostraram eficientes para o isolamento de algumas proteínas dos venenos de serpentes em alto grau de pureza. Estes resultados foram executados durante a disciplina Métodos de Purificação de Biomoléculas pelos alunos do curso Seqüencial em Bio-Tecnologias, corroborando para a idéia de utilização de modelos científicos em cursos didáticos correlacionados à pesquisa. Os ensaios enzimáticos e biológicos serão realizados no decorrer da próxima disciplina, permitindo desta forma um aprendizado seqüencial e mais completo do tema abordado.