Isolados de plantas

Sant`Ana, CD^(1,3); Curtarelli, MB⁽¹⁾; Pereira, ALA⁽¹⁾; Ticli, FK⁽³⁾; Mazzi, MV⁽³⁾; Marcussi, S^(1,2); Magalhães, MR⁽⁴⁾; Giglio, JR⁽²⁾; Sampaio, SV⁽³⁾; Pereira, PS⁽¹⁾; Marins, MA⁽¹⁾; Soares, AM⁽³⁾

Inibição da atividade nucleotídica de venenos de serpentes por extratos de plantas

Venenos de serpentes são compostos principalmente por enzimas das classes PLA2s, proteases, LAAOs, entre outras. Essas proteínas têm sido intensamente estudadas e utilizadas como ferramentas em laboratórios para fins diagnósticos, sendo até mesmo empregadas para o entendimento de patologias e com aplicação na clínica médica. Neste trabalho foi avaliada a inibição da atividade nucleotídica de venenos de serpentes dos gêneros Bothrops e Crotalus, por extratos aquosos de diferentes plantas (Pentacletra macroloba, Mikania glomerata, Casearia sylvestris e Mandevilla velutina). As partes das plantas utilizadas para a elaboração dos extratos foram escolhidas baseando-se em conhecimentos populares de seu uso anti-ofídico, sendo utilizados o caule de P. macroloba, as raízes de M. glomerata, folhas de C. sylvestris e xilopódio de M. velutina. As amostras de venenos e extratos foram previamente incubadas em volume final de 5µL durante 60min a 37ºC (n=3) e posteriormente avaliadas através da técnica de enzimodifusão, sendo utilizado um gel composto por agarose 2%, tampão Tris-HCl 0,05M com MgSO4 0,01M pH 7.4 acrescido de DNA de esperma de salmão como substrato e brometo de etídio para possibilitar a visualização da atividade em UV. Os extratos de P. macroloba e M. glomerata foram eficientes em inibir 100% da atividade nucleotídica induzida pelos venenos de Bothrops jararacussu (50µg), B. neuwiedi (50 e 100µg), C. d. terríficus (50 e 100µg) e C. d. collineatus (50µg), nas proporções de 1:15 e 1:30 (m/m). Os extratos de C. sylvestris e M. velutina inibiram 100% da atividade nucleotídica do veneno de B. jararacussu apenas nas primeiras 6 horas, mostrando o mesmo efeito para C. d. collineatus em 24 horas de experimento, na proporção de 1:12 (m/m). Os resultados apresentados geram dados para a identificação de novos inibidores naturais dos efeitos tóxicos do envenenamento ofídico, além de servirem como uma ferramenta na compreensão do mecanismo de ação das nucleotidases presentes em venenos de serpentes.

Silveira, LB(1); Marcussi, S(2); Ticli, FK(3); Urzeda, MA(2); Biondo, R(2); França, SC(2); Pereira, PS(2); Soares, AM(2)

Natural And Artificial Inhibitors Of Snake Venom Phospholipases A₂

Phospholipases A₂ (PLA₂) from snake venoms induce different toxic and pharmacological effects including myotoxicity, edema, hypotension, platelet aggregation inhibition, convulsion, anticoagulation and others. Natural PLA₂ inhibitors were found in different organisms as plants, marine animals, snake and opossum plasmas. Functional characterization of natural (MMV from Taberna montana extract; manoalid A, from marine animal; heparin, from human blood; BmjMIP, from B. moojeni plasma; CAB from opossum plasma) and synthetic inhibitors (manoalid B, p-bromophenacil bromide BPB, EDTA), upon the enzymatic and pharmacological activity of PLA2 from Bothrops and Crotalus snake venome. PLA₂ was assayed in gels, while the myotoxic and edema inducing were evaluated in vivo. PrTX-I and III (from B. pirajai), BthTX-I and II (from B. jararacussu), crotoxin and CB (from C. durissus terrificus), in the presence or absence of different inhibitors, following an incubation of 30 minutes at 37ºC were used. Among the natural inhibitors, the following decreasing range of activity was observed: BmjMIP > manoalid A > CAB > heparin > MMV; for the synthetic ones, the sequence was: BPB > manoalid B > EDTA. Different levels of inhibition among PLA_2s from Bothrops and Crotalus venoms were also detected. Natural inhibitors were more efficient than synthetic ones for neutralization of the toxic and enzymatic effects induced by PLA_2s. Structural and interaction studies are needed to a better understanding of inhibitory effect in order to design new models of more potent synthetic inhibitors.

MARCUSSI, S.*; TICLI, F.K.**; SILVEIRA, L.B.*; GONÇALVES, M.A.*; NETO, M.M.*; PEREIRA, P.*; FRANÇA, S.C.*; SOARES, A.M.*

Introdução

As Fosfolipases A2 (PLA2s) de venenos de serpentes induzem diferentes efeitos tóxicos e farmacológicos como miotoxicidade, neurotoxicidade, edema, letalidade, hipotensão, inibição da agregação plaquetária, convulsão, anticoagulação e outros. Inibidores naturais de PLA2s (PLIs) foram encontrados em diferentes organismos como plantas, esponjas marinhas, plasma de serpentes e de gambá.

da Silva JO, Coppede JS, Fernandes VC, Sant'ana CD, Ticli FK, Mazzi MV, Giglio JR, Pereira PS, Soares AM, Sampaio SV

Antihemorrhagic, antinucleolytic and other antiophidian properties of the aqueous extract from Pentaclethra macroloba

Several Brazilian plants have been utilized in folk medicine as active agents against various effects induced by snake venoms. The inhabitants of the Amazon region use, among others, the macerated bark of a plant popularly named "Pracaxi" (Pentaclethra macroloba Willd) to combat these effects. We report now the antihemorrhagic properties against snake venoms of the aqueous extract of Pentaclethra macroloba (EPema). EPema exhibited full inhibition of hemorrhagic and nucleolytic activities induced by several snake venoms. Additionally, partial inhibition of myotoxic, lethal, phospholipase and edema activities of snake venoms and its isolated PLA(2)s by EPema is reported. In vivo tests showed that EPema is able to totally inhibit a Bothrops jararacussu metalloprotease (BjussuMP-I) induced hemorrhage, suggesting interaction of the extract compounds with this high molecular weight protein. The extract did induce neither hemorrhage nor death in mice when administered alone by i.m. route. When administered separately by i.m. route, the extract did not induce death in mice at 12.5-300mg/kg doses. Other assays demonstrated that EPema was unable to inhibit fibrinogenolytic and coagulant activities of Bothrops atrox venom. Although the mechanism of action of EPema is still unknown, the finding that no visible change was detected in the electrophoretic pattern of snake venom after incubation with the extract excludes proteolytic degradation as a potential mechanism. The search for new inhibitors of venom metalloproteases and DNAases are a relevant task. Investigation of snake venom inhibitors can provide useful tools for the elucidation of the action mechanisms of purified toxins. Furthermore, these inhibitors can be used as molecular models for development of new therapeutical agents in the treatment of ophidian accidents.

Cambraia, RS(1); Malosso, MG(1); Marcussi, S(1,2); Fernandes, VC(1); Sant`Ana, CD(1, 3); Pereira, AMS(1); Giglio, JR(2); Soares, AM(1,3)

Propriedades antiofídicas do extrato aquoso de Jacaranda decurrens

Segundo dados da Organização Mundial de Saúde (OMS), de 65 a 80 % da população dos países pobres recorrem ao uso de plantas medicinais para o tratamento de seus males. Algumas plantas brasileiras têm sido utilizadas como antiofídicas na medicina popular. Entretanto, poucas são as espécies que têm sido investigadas cientificamente, e ainda menor é o número de seus componentes ativos isolados e caracterizados estrutural e funcionalmente. As raízes da planta Jacaranda decurrens, conhecida popularmante como "Carobinha", são muito indicadas como antiinflamatório, depurativo tônico e cura de ferimentos. Este trabalho avaliou os efeitos antiofídicos do extrato aquoso de J. decurrens sobre diferentes atividades induzidas por venenos de serpentes de várias espécies. O extrato aquoso foi incubado com os venenos por 30min a 37ºC em diferentes proporções e em seguida submetidos aos ensaios. A inibição da atividade fosfolipásica (enzimática) foi medida em gel de agarose suplementado com gema de ovo e eritrócitos humanos. Amostras de venenos e extrato previamente incubadas foram submetidas à eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) para observar a presença ou não de proteólise das proteínas dos venenos pela ação do extrato. A atividade hemorrágica foi realizada por injeção intra-dérmica no dorso de camundongos seguida por medida dos halos hemorrágicos (cm). A indução de edema foi realizada por injeção sub-plantar em camundongos e medida das patas, com paquímetro de baixa pressão. O extrato inibiu parcialmente a atividade fosfolipásica dos venenos das serpentes Crotalus durissus terrificus, Bothrops alternatus e B. moojeni. A hemorragia induzida por B. jararacussu, B. alternatus e B. neuwiedi foi parcialmente inibida pelo extrato na proporção de 1:50 (m/m). A SDS-PAGE mostrou a integridade das proteínas dos venenos após incubação com o extrato nesta mesma proporção. O edema induzido por diferentes venenos foi parcialmente inibido pelo extrato, nos diferentes tempos medidos e concentrações utilizadas. As plantas medicinais constituem uma rica fonte de inibidores naturais de toxinas animais e o extrato desta planta exibe eficientes inibidores de proteases e fosfolipases A2 de venenos de serpentes.