Anticoagulante

MONTEIRO, L.F.; SILVA, L.A.; COPPEDE, J.; GONÇALVES, C.A.G.; SANTOS, F.; SANTANA, E.I.F.; NASCIMENTO, M.M.; MATRANGULO, P.V.F.; BOM, C.A.M.; ARROYO, A.G.; OLIVEIRA, A.H.; FEITOZA, J.A.; PIRES, M.A.; PIZZO, V.; MARCUSSI, S.; SOARES, A.M.

Os venenos animais são ricos numa variedade de peptídeos, proteínas e enzimas com diferentes efeitos tóxicos e farmacológicos de interesse na clínica médica-científica. Proteínas enzimáticas como serino-proteases, metaloproteases e fosfolipases A2 são responsáveis pela indução das atividades coagulante, hemorrágica e miotóxica, respectivamente, induzida pelos venenos de serpentes do gênero Bothrops. Enquanto que no veneno de cascavel Crotalus d. terrificus apresenta proteínas altamente neurotóxicas. Este trabalho propõe novas estratégias cromatográficas para o isolamento de fosfolipases A2 miotóxicas e neurotóxicas, além de enzimas coagulantes como as serino-proteases. Para o isolamento das serino-proteases foi utilizado cromatografia de afinidade em Benzamidina-Sepharose, enquanto que para o isolamento das PLA2s foram utilizadas cromatografia de afinidade Anti-PLA2s-Sepharose e resina de hidrofobicidade em Fenil-Sepharose. O grau de pureza foi avaliado em eletroforese desnaturante (SDS-PAGE) coradas por azul coomassie e pela coloração de prata. Os métodos utilizando cromatografia de afinidade mostraram-se eficientes para o isolamento das proteínas em alto grau de pureza (80-90%) a partir do veneno total, enquanto que a resina de hidrofobicidade foi utilizada como segunda etapa na purificação completa destas proteínas. A SDS-PAGE confirmou o grau de pureza destas amostras, sendo que as PLA2s apresentaram uma massa molecular de ~13.500 e as serino-protease ~30.000, respectivamente. Estas novas metodologias se mostraram eficientes para o isolamento de algumas proteínas dos venenos de serpentes em alto grau de pureza. Estes resultados foram executados durante a disciplina Métodos de Purificação de Biomoléculas pelos alunos do curso Seqüencial em Bio-Tecnologias, corroborando para a idéia de utilização de modelos científicos em cursos didáticos correlacionados à pesquisa. Os ensaios enzimáticos e biológicos serão realizados no decorrer da próxima disciplina, permitindo desta forma um aprendizado seqüencial e mais completo do tema abordado.

Sakurai Y, Shima M, Matsumoto T, Takatsuka H, Nishiya K, Kasuda S, Fujimura Y, Yoshioka A.

One of haemorrhagic toxins present in snake venoms is L-amino acid oxidase (LAO), which catalyzes the oxidative deamination of L-amino acids with the generation of hydrogen peroxide. Although it is widely accepted that LAO alters platelet function, the effects of LAO on human blood coagulation remain largely unknown. The present study demonstrated, for the first time, that M-LAO, LAO purified from the venom of Agkistrodon halys blomhoffii (Japanese mamushi), possesses an anticoagulant activity. Thrombelastography (TEG) showed that M-LAO significantly delayed the onset and the progress of the coagulation process. In addition, the enzyme prolonged the activated partial thromboplastin time (aPTT) dose-dependently, but had little effect on the prothrombin time (PT), suggesting that its principal activity was mediated in the intrinsic coagulation pathway. Furthermore, M-LAO reduced factor IX procoagulant activity in a dose-dependent manner and did not affect other coagulation factors. These results indicate that M-LAO has an anticoagulant activity that impairs the intrinsic clotting by inhibiting factor IX.