Neurotóxica

CONIC 2004

Sant`Ana, CD(1,2); Monteiro, LF(1); Marcussi, S(1), (3); (1)Silveira, LB(1), Cambraia, RS(1); Sampaio, SV(2); Giglio, JR(2); Soares, AM(1,2)

Isolamento e caracterização bioquímica de proteases do veneno de Bothrops neuwiedi pauloensis

Os venenos de serpentes apresentam entre 90 a 95% de seu peso seco constituído de proteínas. Estas proteínas podem apresentar atividade enzimática que determina a toxicidade do veneno. Os efeitos são representados principalmente por: miotoxicidade, hemorragia, coagulação sanguínea, neurotoxicidade, edema, entre outros. Este trabalho tem por objetivo isolar e caracterizar bioquímica e farmacologicamente três proteínas do veneno de Bothrops neuwiedi pauloensis. As proteínas foram obtidas por dois passos cromatográficos, uma exclusão molecular em G-75 eluída em tampão AMBIC 0,05M pH 8.1 e uma afinidade em Benzamidina Sepharose eluída em Tris-HCl 0,05M pH 7.4, Tris-HCl 0,05M pH 7.4 + NaCl 0,5M e glicina 0,02M pH 3.2. Foram determinados, a massa molecular relativa e o grau de pureza das proteínas por SDS-PAGE. A atividade proteolítica das isoformas isoladas foi realizada sobre os substratos, caseína, fibrinogênio (com diferentes variantes), BAPNA, além de verificar sua atividade esterásica sobre o TAME e a atividade fosfolipásica sobre lecitina de gema de ovo. A indução de edema e hemorragia foram avaliadas em camundongos por injeções sub-plantar e intra-dérmica no dorso, respectivamente. As proteínas foram obtidas em quantidade suficiente para a realização dos ensaios e em alto grau de pureza, com a metodologia utilizada, mostrando uma Mr próxima a 26.000. A atividade proteolítica foi observada para as três proteínas, somente sobre o fibrinogênio, apresentando baixa atividade esterásica e nenhuma atividade fosfolipásica. As proteínas não induziram hemorragia na concentração de 100µg por animal, e apenas duas das isoformas induziram uma moderada atividade edematogênica em concentração de 50µg. Os resultados sugerem que se tratam de três isoformas de proteínas da classe das metaloproteases, que são abundantes em venenos de serpentes. Os aspectos abordados neste trabalho poderão trazer informações complementares sobre mecanismos de ação, podendo resultar no melhor entendimento dos efeitos induzidos por estas proteínas durante o envenenamento causado por esta espécie de serpente.

Sant`Ana, C. D. 1,2; Monteiro, L. F. 1; Marcussi, S. 1,3; 1Silveira, L. B. 1, Cambraia, R. S. 1; Sampaio, S. V. 2; Giglio, J. R.2; Soares, A. M. 1,2
E-mail: smarcussi@rbi.fmrp.usp.br

Os venenos de serpentes apresentam entre 90 a 95% de seu peso seco constituído de proteínas. Estas proteínas podem apresentar atividade enzimática que determina a toxicidade do veneno. Os efeitos são representados principalmente por: miotoxicidade, hemorragia, coagulação sanguínea, neurotoxicidade, edema, entre outros. Este trabalho tem por objetivo isolar e caracterizar bioquímica e farmacologicamente três proteínas do veneno de Bothrops neuwiedi pauloensis. As proteínas foram obtidas por dois passos cromatográficos, uma exclusão molecular em G-75 eluída em tampão AMBIC 0,05M pH 8.1 e uma afinidade em Benzamidina Sepharose eluída em Tris-HCl 0,05M pH 7.4, Tris-HCl 0,05M pH 7.4 + NaCl 0,5M e glicina 0,02M pH 3.2. Foram determinados, a massa molecular relativa e o grau de pureza das proteínas por SDS-PAGE. A atividade proteolítica das isoformas isoladas foi realizada sobre os substratos, caseína, fibrinogênio (com diferentes variantes), BAPNA, além de verificar sua atividade esterásica sobre o TAME e a atividade fosfolipásica sobre lecitina de gema de ovo. A indução de edema e hemorragia foram avaliadas em camundongos por injeções sub-plantar e intra-dérmica no dorso, respectivamente.

Bucaretchi F, Herrera SR, Hyslop S, Baracat EC, Vieira RJ

From January, 1984 to March, 1999, 31 children under 15 y old (ages 1-14 y, median 8 y) were admitted after being bitten by rattlesnakes (Crotalus durissus ssp). One patient was classified as "dry-bite", 3 as mild envenoming, 9 as moderate envenoming and 18 as severe envenoming. Most patients had neuromuscular manifestations, such as palpebral ptosis (27/31), myalgia (23/31) and weakness (20/31). Laboratory tests suggesting rhabdomyolysis included an increase in total blood creatine kinase (CK, 28/29) and lactate dehydrogenase (LDH, 25/25) levels and myoglobinuria (14/15). The main local signs and symptoms were slight edema (20/31) and erythema (19/31). Before antivenom (AV) administration, blood coagulation disorders were observed in 20/25 children that received AV only at our hospital (incoagulable blood in 17/25). AV early reactions were observed in 20 of these 25 cases (9/9 patients not pretreated and 11/16 patients pretreated with hydrocortisone and histamine H1 and H2 antagonists). There were no significant differences in the frequency of patients with AV early reactions between the groups that were and were not pretreated (Fisher's exact test, p = 0.12). Patients admitted less than and more than 6 h after the bite showed the same risk of developing severe envenoming (Fisher's exact test, p = 1). No children of the first group (< 6 h) showed severe complications whereas 3/6 children admitted more than 6 h post-bite developed acute renal failure. Patients bitten in the legs had a higher risk of developing severe envenoming (Fisher's exact test, p = 0.04). There was a significant association between both total CK and LDH blood enzyme levels and severity (p < 0.001 for CK and p < 0.001 for LDH; Mann-Whitney U test). No deaths were recorded.