Hemorrágica

Januario AH, Santos SL, Marcussi S, Mazzi MV, Pietro RC, Sato DN, Ellena J, Sampaio SV, Franca SC, Soares AM.

Neo-clerodane diterpenoid, a new metalloprotease snake venom inhibitor from Baccharis trimera (Asteraceae): anti-proteolytic and anti-hemorrhagic properties.

Many plants are used in traditional medicine as active agents against various effects induced by snakebite. Few attempts have been made however to identify the nature of plant natural products with anti-ophidian properties. Baccharis trimera (Less) DC (Asteraceae), known in Brazil as carqueja, has been popularly used to treat liver diseases, rheumatism, diabetes, as well as digestive, hepatic and renal disorders. The active component was identified as 7alpha-hydroxy-3,13-clerodadiene-16,15:18,19-diolide, C₂₀H₂₈O₅, (clerodane diterpenoid, Bt-CD). We report now the anti-proteolytic and anti-hemorrhagic properties against snake venoms of a Bt-CD inhibitor from B. trimera. Bt-CD exhibited full inhibition of hemorrhage and proteolytic activity caused by Bothrops snake venoms. The inhibitor was able to neutralize the hemorrhagic, fibrinogenolytic and caseinolytic activities of class P-I and III metalloproteases isolated from B. neuwiedi and B. jararacussu venoms. No inhibition of the coagulant activity was observed. Bt-CD also partially inhibited the edema induced by other crude venoms, metalloproteases, basic and acidic phospholipases A₂. To further elucidate the inhibitory specificity of Bt-CD against metalloproteases isolated from snake venoms, a deeper understanding of its structure and function is necessary. Furthermore, the potential use of these inhibitors to complement anti-venom as an alternative treatment of snakebite envenomations needs to be evaluated in future studies.

Marcussi, S(1,2); Sant`Ana, CD(3); Mazzi, MV(3); Silveira, LB(1); Cambraia, RS(1); Stabeli, R, G(4); Giglio, JR(2); Soares, AM(1,3)

Metaloprotease não hemorrágica isolada do veneno de Bothrops jararacussu

As metaloproteases de venenos de serpentes compreendem um grupo de enzimas que são responsáveis pelo efeito hemorrágico induzido pelas serpentes Viperidae. Este trabalho objetivou a caracterização bioquímica e farmacológica de uma metaloprotease (Bjussu-MP-II) do veneno de Bothrops jararacussu. A protease foi isolada por cromatografia de troca iônica em CM-Sepharose seguida por cromatografia hidrofóbica em Phenyl Sepharose, sendo verificado seu grau de pureza e peso molecular por SDS-PAGE, e utilizada para caracterização bioquímica. A atividade enzimática foi avaliada sobre caseína, gelatina, fibrina e fibrinogênio, com variações de concentrações, pHs, temperaturas e tempo de incubação para os ensaios com fibrinogênio, sendo também testado o efeito do EDTA, da heparina e de diferentes íons sobre esta atividade. A proteína não apresentou atividade coagulante e anticoagulante, além de não mostrar-se miotóxica com dose de 100µg por via intramuscular, nem letal com dose de 300µg por via intra-peritoneal. A metaloprotease mostrou-se proteolítica, dose dependente, sobre a caseína e o fibrinogênio, permanecendo estável em diferentes pHs e temperaturas, na presença de diferentes íons e com variações no tempo de incubação, perdendo, porém a atividade fibrinogenolítica quando previamente incubada com EDTA ou heparina. A protease não induziu hemorragia em camundongos (150µg) nem se mostrou ativa sobre o BAPNA e o TAME (estando ausente a atividade esterásica). Os aspectos abordados neste trabalho poderão trazer informações complementares sobre mecanismos de ação, relacionando estrutura e função, podendo resultar no melhor entendimento dos efeitos induzidos pelas metaloproteases de venenos de serpentes e da participação, direta ou sinérgica, destas proteínas nos envenenamentos causados pela serpente Bothrops jararacussu.

Fernandes, VC(1); Marcussi, S(2); Amui, SF(3); França, SC(1); Pereira, AMS(1); Soares, AM(3)

Efeito inibitório do extrato aquoso de folhas de Scleria pterota sobre diferentes atividades tóxicas e farmacológicas de venenos de serpentes

Estudos de mecanismos de ação de proteínas de venenos estão sendo desenvolvidos, através de ensaios com diferentes extratos de plantas e inibidores naturais isolados destas. O extrato e os venenos/ou toxinas foram incubados por 30 min a 37°C em diferentes proporções e posteriormente submetidos aos diferentes ensaios enzimáticos e biológicos. O extrato mostrou-se eficiente em inibir a atividade fosfolipásica dos venenos de Bothrops jararacussu e B. alternatus, não tendo efeito sobre os venenos de B. moojeni, B. neuwiedi e Crotalus durissus terríficus, nas proporções de 1:100 e 1:200. A coagulação induzida pelos venenos foi totalmente inibida na presença do extrato em proporção de 1:10. A hemorragia induzida por B. jararacussu, B. moojeni, B. alternatus e B. neuwiedi foi inibida pelo extrato na proporção de 1:50, mostrando maior inibição para os dois primeiros venenos. A eletroforese demonstrou que o extrato não degrada as proteínas dos venenos de serpentes, sugerindo a possibilidade de interações específicas entre os inibidores vegetais e as toxinas alvo. Assim, extrato de S. pterota inibiu as atividades enzimáticas e tóxicas dos venenos de serpentes interagindo de forma diferente para cada um deles, sem alterar a integridade das proteínas que os compõe. Os aspectos abordados neste trabalho poderão trazer informações complementares sobre mecanismos de ação destes venenos.

Amui, SF(1); Marcussi, S(2); Urzêda, MA(3); Silveira, LB(3); Coelho, MFB(4); Pereira, AMS(3); França, SC(3); Soares, AM(1)

Jatropha elliptica (Pohl.) Muell. Arg., uma planta herbácea-subarbustiva da família Euphorbiaceae, conhecida popularmente como “batata de tiu, jalapão, raiz de cobra, e tiu”, é uma espécie característica dos cerrados brasileiros muito utilizada na medicina popular como depurativo do sangue, no tratamento de sífilis e em envenenamentos ofídicos, entre outras utilizações (Pio Corrêa, 1984; Van Den Berg & Silva, 1988). Jatropha elliptica foi selecionada para este estudo por apresentar atividade antiofídica de uso preconizado na medicina popular na região do Brasil Central (Silva, 1998). O uso de extratos de plantas como antídoto para venenos de serpentes é uma antiga opção utilizada em muitas comunidades que não têm acesso à soroterapia, podendo ser um substituto alternativo e/ou complementar. Acidentes com animais peçonhentos constituem um problema de saúde pública, tanto pela freqüência com que ocorrem, quanto pela gravidade de muitos deles (Ribeiro, 1990). No Brasil ocorrem entre 19 a 22 mil casos de acidentes ofídicos por ano, dos quais 90,5% são causados por serpentes do gênero Bothrops (Pinho e Pereira, 2001). Diversas espécies vegetais tem sido descritas como antiofídicas e alguns princípios ativos foram isolados e caracterizados, como por exemplo, de Eclipta prostata, Tabernaemontana catharinensis, Casearia sylvestris, Mandevilla velutina, Sapindus sapindus e Cordia verbenacea.

Sant`Ana, C. D. 1,2; Monteiro, L. F. 1; Marcussi, S. 1,3; 1Silveira, L. B. 1, Cambraia, R. S. 1; Sampaio, S. V. 2; Giglio, J. R.2; Soares, A. M. 1,2
E-mail: smarcussi@rbi.fmrp.usp.br

Os venenos de serpentes apresentam entre 90 a 95% de seu peso seco constituído de proteínas. Estas proteínas podem apresentar atividade enzimática que determina a toxicidade do veneno. Os efeitos são representados principalmente por: miotoxicidade, hemorragia, coagulação sanguínea, neurotoxicidade, edema, entre outros. Este trabalho tem por objetivo isolar e caracterizar bioquímica e farmacologicamente três proteínas do veneno de Bothrops neuwiedi pauloensis. As proteínas foram obtidas por dois passos cromatográficos, uma exclusão molecular em G-75 eluída em tampão AMBIC 0,05M pH 8.1 e uma afinidade em Benzamidina Sepharose eluída em Tris-HCl 0,05M pH 7.4, Tris-HCl 0,05M pH 7.4 + NaCl 0,5M e glicina 0,02M pH 3.2. Foram determinados, a massa molecular relativa e o grau de pureza das proteínas por SDS-PAGE. A atividade proteolítica das isoformas isoladas foi realizada sobre os substratos, caseína, fibrinogênio (com diferentes variantes), BAPNA, além de verificar sua atividade esterásica sobre o TAME e a atividade fosfolipásica sobre lecitina de gema de ovo. A indução de edema e hemorragia foram avaliadas em camundongos por injeções sub-plantar e intra-dérmica no dorso, respectivamente.