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Introdução

As fosfolipases A2 (PLA2s) são enzimas que catalisam a hidrólise dos fosfolipídeos. Encontram-se amplamente distribuídas em tecidos de mamíferos, microorganismos e venenos de répteis e artrópodes.

Ojetivo

Este trabalho enfatiza o estudo funcional comparativo entre uma PLA2 ácida atóxica (BthA-I-PLA2) e duas PLA2s básicas miotóxicas (BthTX-II e BthTX-I) isoladas do veneno de Bothrops jararacussu.

Metodologia

As enzimas foram previamente isoladas por cromatografia de troca iônica e RP-HPLC, e o grau de pureza observado em eletroforese. A atividade fosfolipásica foi medida em gel de agarose suplementado com gema de ovo e eritrócitos humanos para a determinação das concentrações mínimas que induziam 10mm de diâmetro de hemólise. A BthA-I-PLA2 (0,08µg) e a BthTX-II (20µg) foram incubadas em diferentes temperaturas, pHs e íons divalentes para a análise da atividade enzimática comparativa. Foram realizadas também as atividades miotóxica, edematogênica, citotóxica sobre células endoteliais, tumorais, hipotensora, efeitos sobre a agregação plaquetária e ruptura de lipossomos.

Resultados

Observou-se que ambas as enzimas são estáveis em diferentes temperaturas (-20 a 60°C) (fig. 3), e apresentam melhor atividade em pH variando entre 7,0 e 9,0 (fig. 3). Os íons divalentes atuaram inibindo ou potencializando diferencialmente a atividade fosfolipásica (fig. 4). A BthTX-II mostrou-se mais edematogênica (1,71mm) do que a BthA-I-PLA2 (0,42mm) (fig. 5), além de apresentar atividade miotóxica (fig. 6), citotóxica (fig. 7) e letalidade (tab. 1), que estão ausentes na PLA2 ácida. Somente a BthA-I-PLA2 atóxica induziu hipotensão arterial, ambas induziram a ruptura de lipossomos (fig. 8), enquanto que o efeito sobre plaquetas foi antagônico, a BthTX-II induziu agregação plaquetária e a BthA-I-PLA2 inibiu. 

Discussão e conclusão

Tanto as modificações químicas quanto os inibidores interferiram particularmente na toxicidada e efeitos farmacológicas das PLA2s. A PLA2 ácida apresentou atividades farmacológicas de interesse médico-científico além de mostrar-se atóxica, enquanto que as PLA2s básicas, embora também apresentem atividades farmacológicas, mostraram-se tóxicas. Os resultados sugerem diferentes mecanismos de ação entre as PLA2s ácida e básicas do veneno de B. jararacussu, que talvez possam ser explicados pelas diferenças estruturais. Estudos de caracterização de PLA2s de venenos podem resultar na descoberta de moléculas com grande potencial terapêutico ou modelos para a elaboração de futuros fármacos.

CONIC 2003